ROS

グルタチオン、またはGSHの検出でGSHレベルを使用する方法、システイン、グルタミン酸およびグリシンから作られる非必須トリペプチドである。
これは、体内の様々な代謝過程の結果として分子状酸素から形成されるROSの有害な影響、又は活性酸素種から、身体の細胞や臓器を保護する強力な抗酸化物質である。グルタチオンのような抗酸化物質は、ROSを中和し、それらはと対話し、細胞内のDNAやタンパク質の損傷を防ぐ。あなたの体のGSHの酸化と還元型の比率は、あなたの体のROS関連の酸化ストレスの指標である。
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5 mLシリンジに装着23ゲージの蝶針でanticubetal静脈に静脈穿刺により血液の約2ミリリットルを描き多くの命令を表示します。ヘパリンナトリウムを含むチューブをテストし、軽く混合するためのチューブを反転するサンプルを追加します。検索検索2

この5分間毎分2,500回転で、試料を遠心分離することによって赤血球を収集します。
細胞を破壊するために3回フリーズし、サンプルを解凍。 12,000 rpmで10分間4℃のために細胞溶解液を遠心分離し、上清を回収。買取3

この5％スルホサリチル酸を添加し、4℃で5分間、12,000 rpmでサンプルを遠心分離することにより、試料からタンパク質を除去。 -112度で除タンパクし、上清を保管してください。検索のiPhone 4

このチオール検出剤、GSHレダクターゼ、GSHの反応混合物を作るキットメーカーによって示された割合でニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸アッセイバッファーを混ぜる。各化学物質の量は、実行しようとテストの数に依存します。
16、32、63、125、250、500マイクロリットルの濃度を得るために5％スルホサリチル酸でGSH反応混合物を希釈する。検索検索5

このマイクロプレートのウェルに除タンパク血液サンプルの1〜10マイクロリットルを追加します。 10マイクロリットルに各ウェルの全容量をもたらすために、各ウェルに、検査キットで提供されて連続的に希釈しGSH標準溶液を追加します。検索検索6

ではマイクロプレートの各ウェルに、ステップ4で作成したGSHの反応混合物の90マイクロリットルを追加します。 30秒間プレートを揺することによって試薬を混ぜる。
検索検索7

この405と415ナノメートルの波長の光の下にプレートを配置することにより、直ちに吸光度を測定します。 30分間静置します。インキュベーション中、5分後に吸光度測定値を取る。 5％スルホサリチル酸及びトリフルオロメタンスルホン酸溶液を用いて加工したサンプルの検索検索8

希薄6ミリモル。これは、溶液からすべて減少GSHが削除されます。マイクロプレートのウェルとを繰り返し5、図6、図7に、このソリューションの1〜10 micolitersを追加します。これは、サンプル中の酸化GSH量を推定するのに役立ちます。
減少し、酸化型グルタチオンの両方のGSH曲線を取得するために、グラフ上の検索検索9

プロットは吸光度、サンプル濃度。 GSHの両方の形式の間の比率を計算します。増加したレベルの酸化的GSHレベルは酸化ストレスとROSを示す。
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