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プラークアッセイ法

     編集:病気

アッセイは、ウイルスを単離および精製し、ウイルス力価(感染をもたらすウイルスの最低濃度)を決定するために使用される技術である。
最初はウイルス学的アッセイと呼ばれるプラークアッセイが、バクテリオファージの感染力を測定し計数するために開発された。 Biology-Online.orgによると、後に哺乳動物ウイルスの計数にも適用されました。事実

プラークは細胞のコンフルエントな単層培養物です。 Biology-Online.orgによると、1つのウイルス粒子による細胞の感染の結果として形成される。細胞が感染すると、ウイルスは複製し、最終的に細胞を殺す。さらに、新たに複製されたウイルス粒子は、周囲の細胞を広げ、感染させ、殺す。




プラークアッセイでは、培養物をまず特定の色素で染色する。 Biology-Online.orgによると、このダイは生きている(生きている)細胞だけを染色する。結果として、死んだ細胞は、染色されたバックグラウンドに対して培養液中で染色されないように見える。現在、プラークアッセイは、溶血によって赤血球を破壊する抗体を産生する細胞を検出するために適用される。





赤血球は、赤血球)は、ヘモグロビンを含み、血液中、肺および組織から酸素および二酸化炭素を輸送する。
赤血球が開いてヘモグロビンを放出すると、溶血が起こるとBiology-Online.orgが報告している。結果として、プラークアッセイにおいて、基礎は透明なプラークであり、赤血球が抗体によって溶血されたことを示す。


方法パートI

プラークアッセイを実施する前にウイルスストックの倍希釈物を調製し、0.1mLアリコートを細胞単層に入れる。この混合物をウイルスが細胞を攻撃する時間を有するようにある時間インキュベートする。
さらに、単層は、Vincent Racanielloによる「ウイルスの検出:プラークアッセイ」に従って、物質(通常は寒天)を含む栄養培地で覆われている。栄養培地はゲルを形成し、培養物をインキュベートした後、元の感染細胞はウイルス子孫を放出する。ゲルは、周囲の細胞へのウイルスの拡散を制限し、その結果、感染性粒子は、プラークと呼ばれる円形ゾーンを生成する。時間とともに、肉眼で見える大きさまで歯垢が成長し、視認性を向上させるために色素が使用されます。


方法パートII

ウイルス力価はミリリットル当たりPFUと呼ばれるプラーク形成単位。
それらは数えられ、最小限の誤差のために、10〜100のプラークを含むプレートのみが計数される。さらに、「ウイルスの検出:プラークアッセイ」によれば、計数した100個のプラークごとに、同じ力価がプラスまたはマイナス10%で変化する。したがって、正しく実施された場合、プラークアッセイの推定誤差は約10パーセントである。



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