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DNAサンプルに制限酵素を加えます。
例えば、一般的に使用されている酵素であるEcoR1を使用してください。
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この混合物を本質的に反応が起こる場所である緩衝液に加えます。
New England BioLabsマニュアルに示されているように、反応温度を上げます。各制限酵素は、それが最もよく機能する特定の反応温度を有する。さらに、各酵素は、それが標的とするように設計された特定のヌクレオチド配列を有する。 EcoRIはヌクレオチド配列CAATTCのDNAをスキャンして切断する。この正確なヌクレオチドの順序は、酵素がDNAに結合し切断するために存在しなければならない。
この時点まで、不要な活性を防ぐためにすべての物質を氷上に置いてください。
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マニュアルに記載されているように反応が起こった後、ゲル電気泳動装置で混合物を実行してDNAを分離しますサイズに基づいたフラグメント。最も小さい断片はゲルを一番遠くに移動します。
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各DNA断片が移動した距離を測定します。これらの5つのステップは、複数の異なる酵素で別々に繰り返す必要があります。
制限地図の作成
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ゲルから得られたデータを使用して、異なる制限酵素を用いて制限する。
各酵素によって産生される異なる断片の長さを比較することによって制限部位の順序を導く。例えば、酵素＃1が等しい長さの2つの断片を産生し、酵素＃2が等しい長さの3つの断片を産生した場合、酵素＃1はDNAの半分を切断し酵素＃2はDNAを3分の1に切断すると結論することができる。 br> 8
ステップ2で作成した結論を使用して、DNAの制限部位の順序を組み立てる。
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