ビオチン化プロトコル

ビオチン化は、ビオチンまたはビタミンHをタンパク質または他の分子に結合させるプロセスである。
この科学的手順は、DNA、タンパク質、および抗原を含むバイオテクノロジーおよび分子生物学の研究で主に使用されています。これらは、体の免疫系が侵入者として認識する分子です。ビオチン化プロトコルには、抗体およびペプチドのビオチン化、ならびに細胞表面のビオチン化が含まれる。抗体のビオチン化





抗体のビオチン化抗体のタンパク質にビオチンを結合させるために、抗原が体内に入ると、技術者はpH9で重炭酸ナトリウム（NaHCO3）を使用する。ジメチルスルホキシド（DMSO）; NHS-ビオチンおよびPBSと呼ばれる塩類物質。
サンプルを重炭酸ナトリウムと混合し、これを後にDMSO中のNHS-ビオチンに添加する。次いで、この溶液を分析した抗体に添加し、室温で4時間、または華氏39.2度で一晩、回転子と呼ばれる装置の一部でインキュベートする。最後に、溶液をPBSで希釈する。


細胞表面ビオチン化






細胞表面のビオチン化プロトコールでは、技術者は組織培養、リン酸緩衝生理食塩水（PBS）をCurrent Protocols in Protein Scienceによると、アミノ基を含む酸性度とTrisClとのバランスをとるためのスルホスクシンイミジル-2-（ビオチンアミド）エチル-1,3-ジチオプロピオネート緩衝液である。
細胞をビオチンおよび緩衝液と混合し、デカントし、 。固体内容物および特定のタンパク質は、後でゲル電気泳動プレート上で分析される。ペプチドのビオチン化を行うために、使用される試薬はNHS -Siビオチンは、「モノクローナル抗体：実用的アプローチ」のPhilip Shepherdによると、ペプチドはアミノ酸の短い断片で、タンパク質とDNAを形成する分子です。このプロトコールでは、市販の溶液NHS-SSビオチンを水に溶解する。次いで、酸性度またはpHのバランスをとるために、重炭酸ナトリウムと一緒にペプチドサンプルを加えます。次いで、溶液を氷上で2時間インキュベートする。
技術者はビオチン分子の有無にかかわらずサンプルを観察することができます。