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このプロトコール中、技術者は、プロトコールに従って、pH7.4のトリス溶液、塩化ナトリウム、メルカプトエタノール(ME)およびエチレンジアミン四酢酸(EDTA)を用いてポリマーアミロース樹脂20mlを洗浄する。オンライン。
細胞サンプルを添加し、遠心分離し、ゲル電気泳動で分析する。また、クロマトグラフィーカラムでクロマトグラフィーを行う際に、技術者が溶出したり溶液の構成成分を観察したりするクロマトグラフィで分析します。
小規模MBP融合タンパク質の精製
ヘブライ大学エルサレムの生物学者は、イソプロピルbD-1-チオガラクトピラノシド(IPTG)試薬を使用し、華氏39.2度で8,000回転/分で10分間回転培養する。その後、上澄み液を除去し、冷PBS緩衝液をサンプルに混合し、これをいくつかのチューブに分けて再度遠心分離する。
サンプルは、その後、後方分析のために華氏-112度に保たれています。
マルトース結合タンパク質融合タグ精製
アフィニティータグは、分子生物学タンパク質を検出して精製する。このプロトコルは、ポリヒスチジンタンパク質マーカー(HisMBP)の構築を含む3つの段階に分割された複雑な一連の手順である。タンパク質の溶解度を評価するパイロット実験; Nature Protocolsによると、MBP分子の大規模精製が可能になりました。
E.coliサンプルとは別に、アンピシリン、カナマイシン、IPTG、アンヒドロテトラサイクリン、グルコース一水和物、細胞溶解バッファー、DNAポリメラーゼ、PCRプライマー、Tris-アセテート-EDTAおよびエチジウムブロマイドを使用しています。 >
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