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接着細胞プロトコル

     編集:病気

培養中の細胞は、血液細胞のような懸濁液中で培養された形態、または付着し得る表面を必要とする線維芽細胞のような細胞のいずれかである。
いくつかの表面は、細胞のタイプおよび研究に依存して、異なる細胞外マトリックスにおいてコーティングを必要とすることがある。全ての細胞培養は、無菌条件下で実施する必要がある。最適な環境

大部分の細胞タイプは、ダルベッコ変法イーグル培地(DMEM)またはロズウェルパークメモリアル研究所(RPMI)で、10%ウシ胎仔血清、2ミリモルのアミノ酸グルタミンおよび抗生物質、例えば100単位のペニシリンおよび0.1ミリグラム/ミリリットルのストレプトマイシンが挙げられる。細胞は37℃、5%二酸化炭素で加湿インキュベーター内の培地に保存されています。




細胞は毎日感染、死亡または増殖がないかチェックする。組織培養フラスコが細胞内で80%被覆されたら、細胞の健康状態および対数増殖期を維持するために細胞を分けなければならない。培地を除去し、細胞をリン酸緩衝生理食塩水で洗浄する。接着細胞は、細胞接着タンパク質を除去するためにトリプシンおよびエチレンジアミン四酢酸(EDTA)の添加を必要とする。穏やかに攪拌すると細胞が除去されるはずです。トリプシン/EDTA溶液を中和するために培地を加える必要がある。



継代培養

希釈細胞およびtryspin /EDTA溶液を遠心分離してペレット化し、洗浄することができる細胞。細胞を培地に再懸濁し、希釈して新しいフラスコに再播種することができる。細胞が分裂するたびに、細胞の通過数が1ずつ増加します。




培地は週に2回交換する必要があります。新しい、暖かいメディア。




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