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灌流テクニック

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灌流技術は、組織内に存在する個々の細胞すべてに迅速かつ均一な固定を提供する。
目的の組織を得るために、4%パラホルムアルデヒド固定液を血管系を通過させる。特定の器官における薬物投与の主な標的部位は、この技術の助けを借りて同定することができる。灌流はまた、科学者が人間の脳の構造的および機能的構成を理解する助けとなりました。あなたが必要とするもの
動物(ラットまたは猿)
灌流ポンプ、ビーカー
固定剤(4%パラホルムアルデヒド)
シリンジ針
灌流滴セット
はさみ
メス
鉗子と0.9%食塩水
氷箱

詳細な説明を表示する

1

パラホルムアルデヒド40gを水800mlに混合して新鮮な4%パラホルムアルデヒドを調製する。
攪拌しながら溶液を60℃に加熱する。溶液を4℃に冷却する.pHメーターを用いてpHを9.5に調整する。 pHを調整するために、氷酢酸を添加して所望のpHを得る。灌流ポンプをセットアップする。すべてのガラス部分と灌流針を取り付けます。灌流ポンプのチューブに水道水100 mlを流し、ガラス部分から残留物を除去する。固定具のビーカーを氷箱に入れます。


3

灌流チューブの端を開き、固定ビーカーに入れます。動物の大きさに応じて溶液の量を調整します。灌流ポンプバルブをゆっくりと安定した滴下に調整します。バルブを閉じます。
灌流装置に0.9%(重量/容量)の生理食塩水を満たしてください。

4

手術台の近くに手術器具を設置します。体重(ケタミン0.5 mg /kg)に従って動物に麻酔薬を注射する。動物を手術台の上に置いてください。

5

ダイヤフラムの長さに沿って、メスで切る。大きなはさみで、鈍い側を下にして、横隔膜の底にある結合組織を切断する。心を晒す鼓動する心臓を鉗子で保持し、左心室に針を挿入する。

0.9%生理食塩水の流れを許容するように灌流ポンプの弁を開く。溶液が自由に流れ、動物が生きていることを確認します。
動物の心は絶えず鼓動しているはずです。血液を生理食塩水で置き換えたら、溶液を4%パラホルムアルデヒドに変更する。

7

目的の組織を灌流を停止させ、解剖する。 4℃で同じ培地に組織を保持する。


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