レトロウイルス感染プロトコル

レトロウイルスは、カプシドおよび脂質エンベロープ中にカプセル化されたRNAゲノムを含み、それらが感染する宿主細胞の膜の受容体にそれらを連結するのを助けるポリペプチド鎖を含む。
ほとんどの細胞の遺伝情報はDNAにコードされていますが、レトロウイルスのものはRNAに含まれています。レトロウイルスは酵素逆転写酵素も有し、それらを宿主DNAに接着させる。特定のプロトコールの後に、DNA細胞にこれらのウイルスを意図的に感染させる実験室がある。実験室の準備

レトロウイルス感染の過程を助けるためには、ある種の実験器具と消耗品が必要です。装置には、1つのピペット補助具、1つのピペットマン、1つの組織培養フード、37℃および32℃のインキュベーター、およびエッペンドルフ遠心分離機が含まれる。
消耗品には、組織培養プレート、使い捨てパスツールピペット、適格レトロウイルス上清、フィルター滅菌ポリブレン、フィルター滅菌硫酸プロタミンが含まれます。


感染細胞の準備

事前感染のためには、標的細胞を組織培養プレートに分注し、37℃のインキュベーターで5％CO 2で一晩インキュベートしなければならない。インキュベーション期間の目的は、50％コンフルエントな細胞を作製することである。細胞を事前に準備することは、細胞が感染プロセスのために最適化されることを確実にするために必要である。
スタンフォード大学のNolan Labは、試験結果を最適化するためにNIH 3T3細胞を感染させることにより、細胞感染が常に始まることを推奨しています。


細胞に感染する

<インキュベーション期間が終わった後、研究者は細胞が健康で正しいコンフルエンスであることを確認する必要があります。組織培養フードを用いて、細胞物質を吸引し、ウイルス上清を細胞に適用する。一度塗布すると、プレートは静かに前後に揺り動かして均等に分散させる必要があります。
細胞をEppendorf遠心分離機に入れ、摂氏30度の温度で2,500rpmで90分間回転させることにより、細胞をスピン接種すべきである。その後、細胞を32℃で1〜2日間インキュベートする必要があります。その後、ウイルスは抽出された細胞と交換され、インキュベーターに入れられ、最初の感染から3〜7日後に分析されます。