細胞凍結プロトコール

細胞を凍結保存することは、細胞を長期間保存することができるため、研究、獣医学および動物育種にとって不可欠です。
しかし、選択された凍結法は、細胞への損傷を低減または防止しなければならない。凍結保存剤および方法は、細胞のタイプに依存し得る。準備

細胞は健康で、活発に増殖して90％の生存率で凍結する必要があります。生存率を維持し、細胞の損傷を防ぐためには、取扱いと高速遠心分離に注意し、細胞の損傷を防ぐためには激しいピペッティングまたは吸引を避ける必要があります。


凍結保護

凍結保護剤は細胞内水の代用として使用される。この薬剤は、細胞内で起こる氷の結晶化や脱水を防止します。
滅菌グリセロールおよび滅菌ジメチルスルホキシドは、細胞型に応じて、ウシ胎仔血清または増殖培地のいずれかで希釈された濃度5〜15％（容量あたりの容量）で使用されることがよくあります。および保存

凍結混合物中の細胞はゆっくりと冷却する必要があります。プログラム可能な冷凍庫が利用できない場合、クライオバイアルは組織内に巻きつけるか、または発泡スチロール中に置くことができ、これにより凍結プロセスが遅くなる可能性があります。細胞は摂氏マイナス80度で24時間保存し、その後、長期保存のために液体窒素に移すべきです。



解凍

凍結した細胞は、すぐに解凍する必要があります。摂氏37度の水浴を使用することができます。液体窒素がバイアルに入ることができ、融解時に爆発する可能性があるので、液体窒素中に貯蔵された細胞には注意が必要である。凍結混合物は、増殖培地で希釈する必要があります。細胞生存率は、色素トリパンブルーと正常細胞培養で評価する必要があります。