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一部の細胞はペトリ皿の底に付着しているか、液体中に浮遊しています。細胞は植物または動物起源のものであってもよい。組織培養で使用される細胞は、生物から直接採取されたことを意味する初代細胞、または培養で維持された細胞系であり得る。細胞株はしばしば癌細胞であり、これは実験を計画または解釈する際に考慮する必要があります。
細胞を優しく治療する
細胞をペトリ皿から取り出し、スクレイピングまたはプロテアーゼ、一般的にはトリプシンおよびEDTAで処理する。スクレイピングは多くの細胞を死滅させるので、細胞ライセート（分析のための細胞内容物の液体調製物）を調製するとき、またはトリプシン/EDTAを絶対に避けなければならないときにのみ使用するべきである。トリプシン処理は、細胞を皿に付着させるタンパク質しかし、細胞の膜上のほとんどの他のタンパク質も。細胞はボールを持ち上げ、ディッシュとの結合を再確立するために、通常は一晩かかる。
最小限の量のトリプシン（25cm 2フラスコに約1mLを加える）をフラスコを5秒以下で回転させて単層をコーティングし、次いで過剰のトリプシンを注ぎ出しまたは吸引することにより、単層が露出するトリプシンの量が減少する。トリプシン処理中に細胞をインキュベーター内に置いてください。
細胞がディッシュの底から滑った後、血清を含む培地を加え、溶解物をピペットでゆっくりと吸い上げます。少量の培地を皿の中に残して、数回ピペットを上下に動かして塊を分け、均等に懸濁させます。
ピペットに泡を吸い込まないでください。また、細胞懸濁液を激しく混合したりボルテックスしたりしないでください。
細胞は、このボールアップ状態で非常に壊れやすいです。
細胞培養技術が幼児期にあった場合、胎児ウシ血清（FBS）は、細胞を溶解する免疫系タンパク質である補体タンパク質を含むことが知られていた。補体タンパク質は、細胞培養において望ましくない。 56℃で30分間FBSを加熱不活性化すると、補体タンパク質が不活性になる。予熱FBSは37℃までも補体タンパク質を不活性化するのに十分である。
初期の段階では、熱不活性化FBSもマイコプラズマおよび他の汚染物質を殺した。この時、0.45μmフィルターでフィルター滅菌を行った。今日、我々は、0.1umまたは0.04umフィルターを通してFBSおよび培地を滅菌する。マイコプラズマはそれを通過しません。
これは、熱を失うかどうかの問題を残します。
熱失活は、FBSのすべての成分を分解します - ビタミン、アミノ酸、 - ある種の厄介な細胞株の閾値を下回っている可能性があります。
増殖が遅くて細い細胞株で作業している場合は、単にFBSを滅菌することを検討してください。これにより、細胞の丈夫さが増します。
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