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競合結合アッセイプロトコル

     編集:病気

競合結合アッセイは、受容体と呼ばれる細胞表面上に見られる特殊タンパク質のタンパク質または化学物質の結合能力を決定する実験である。
この方法は、医学研究においてしばしば使用されるが、どの薬物が受容体に結合し、受容体活性を改変するかを決定することもでき、これは次に細胞の挙動を変えることができる。細胞の準備

細胞を氷冷リン酸緩衝生理食塩水(PBS)に再懸濁する。特殊な市販のタンパク質アッセイを使用して、タンパク質濃度を測定して同等のタンパク質レベルを確認する。


アッセイ

レセプターに結合することが知られている放射能標識タンパク質リガンドを細胞または組織懸濁液に添加する。
研究中の試験薬物またはタンパク質である競合物質を添加し、放射性リガンドおよび細胞懸濁液と共にインキュベートする。試験薬物の濃度の範囲を検討すべきである。インキュベーション後、結合したリガンドと結合していないリガンドを分離し、放射能を測定する。



データ分析

測定される通常の測定は、受容体を阻害する最大濃度の半分であるそうでなければIC50として知られている。これは、グラフのX軸上に対数スケールで濃度をプロットすることによって計算され、一方、Y軸は阻害のパーセンテージを表し、 S字型のシグモイド曲線を生成する必要があります。
IC50は50%の阻害点であり、対応する濃度はグラフから読み取ることができます。


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