ダイレクト& amp;間接ELISA

酵素結合免疫吸着アッセイ（ELISA）は、抗体 - 酵素複合体と固体表面上に固定されていない抗原または抗体との反応を含む。
コンジュゲートされた酵素を適切な基質と共にインキュベートすると、生成物が形成される。生成物の形成は、抗原または抗体の存在を検出するのに役立ち、その量は、生じた抗原 - 抗体反応の量の尺度を提供する。 ELISA試験は、直接的および間接的の2つの形態で行うことができる。試験フォーマット

直接ELISA試験では、一次抗体がマイクロタイタープレートの壁に保持されています。抗原を含むと疑われる試料を添加すると、抗原抗体反応が起こる。次に、抗原と反応することができる酵素結合二次抗体を添加する。抗原が試料中に存在する場合、それはこの酵素結合抗体に結合する。
無色の基質を添加すると、発色すると抗原の存在を示します。間接的ELISAにおいて、抗原はマイクロタイタープレートの壁に保持される。抗体を含むと疑われるサンプルを添加すると、抗原抗体反応が起こる。次に、抗体の非結合領域と反応することができる酵素結合二次抗体を添加する。無色の基質を添加すると、使用されるサンプルに抗体が含まれていると色の発達につながります。


簡単な検査

利用可能です。さらに、所与の種においていくつかの一次抗体を作製し、検出のために同じ二次抗体を使用することが可能である。これにより、間接的ELISAが容易に実施される。
直接ELISAにおいて、一次抗体は、試料中に存在することが疑われる特定の抗原と反応するように特異的に調製されなければならない。これは間接的な試験と比較して直接的なELISAを不利にします。



試験の迅速性

<直接試験>直接的なELISAの試験は、単一の抗体のみを使用する。間接的ELISAは、試験手順中に第2の抗体とのインキュベーションの追加工程を必要とし、結果を得るのが遅れる。


感受性

直接ELISA試験は、信号増幅がはるかに少ないため、試験の間接的な形態よりも感度が低い。
さらに、酵素による一次抗体の標識は、その免疫反応性プロファイルを損なう可能性がある。間接的ELISAの場合、一次抗体は標識されておらず、したがってその免疫反応性を保持する。さらに、各一次抗体は、二次抗体と結合することができる多くのエピトープを有する。これは信号の増幅を可能にし、方法の感度を改善する。しかし、抗原と二次抗体との交差反応が起こり、結果に誤りが生じる。ダイレクトELISA法にはこのような可能性はありません。