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細胞は、細胞内タンパク質の安定性を維持するために固定する必要があります。ホルムアルデヒドまたは氷冷アセトンのような多数の固定剤を使用することができる。固定後、抗体が細胞に入ることを可能にするために、細胞膜を接着させる必要がある。
TritonやNP-40などの界面活性剤や氷冷メタノールを使用して細胞膜に穴を開けることができます。
ブロッキングバッファーリン酸緩衝食塩水、BSA /PBSで希釈した0.5％ウシ血清アルブミン。非特異的結合を減少させるために、細胞をブロッキング緩衝液中でインキュベートする。ブロッキング緩衝液で希釈した一次抗体を添加し、室温でインキュベートして最適な時間を確保する。ブロッキング緩衝液で洗浄する。
蛍光タグで標識された二次抗体を室温で30分間インキュベートする。
ブロッキング緩衝液中の未結合抗体洗浄細胞を除去する。細胞をペレットにスピンし、PBSで再懸濁し、フローサイトメーターで分析する。
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