どのような共焦点顕微鏡が使用されているか？

第3の光学顕微鏡法は、試料を物理的に切断することなく3次元組織を観察するためには使用できない。
しかし、共焦点走査顕微鏡法は、観察されない標本全体の三次元構造をより直接的に見る方法を提供する、代替の観察方法である。電子撮像法により、ユーザは、焦点面の上下から来る光を拒否しながら、厚い試料の所定の面に焦点を合わせることができる。共焦点顕微鏡が必要な理由


共焦点顕微鏡法は、細胞や組織などの標本の3次元構造の画像を得るために、生物科学や他の業界の研究者によって使用されています。また、何らかの理由で予め切片にスライスすることができない試料の顕微鏡構造を観察するために用いられる。
これらの課題は、複雑なコンピュータベースの画像処理プログラムを使用することで満たすことができますが、この方法は遅く、大きな計算力が必要です。


共焦点顕微鏡対標準光学顕微鏡

従来の光学顕微鏡で厚い標本を見ると、特定の面に焦点を合わせることによって得られた画像は、上下にある標本の部分から来る、ぼやけた、焦点外の読み取りによって悪化しますフォーカスの面。通常の光学顕微鏡検査がうまくいくためには、試料を薄切片にスライスして分析する必要があり、切片の厚さは画像の明瞭度に反比例する。
しかし、おそらく、3次元に関する貴重な情報は、サンプルがセクション化されたときに失われ、前述のように、いくつかのサンプルを簡単にセクション化することはできません。

共焦点走査顕微鏡は、厚いサンプルの特定の平面に焦点を当て、その平面の上下の焦点外れ領域から来る光を拒否します。この結果、きれいな「光学セクション」が得られ、様々な深度で撮影されたこれらのセクションのシーケンスから、コンピュータプログラムは3次元画像を再構成することができる。この戦略は、CATスキャナが人間の体全体を調査している放射線医師にとっては似ています。
両方の方法がインタラクトな構造物の内部のクリーンな断面図を提示するためです。

装置は一般的に蛍光光学系で使用され、いつでも機械の光学系が試料のある深さの単一点にスポットライトを集めます。ピンポイント照明の非常に明るい光源が必要であり、これは通常、光がピンホールを通過するレーザによって提供される。ピンホールアパーチャを備えた検出器は、照射されたサンプルから放出された蛍光を集める。特定の焦点からの光だけが検出器に入り、装置は焦点面の外側の領域から来る光を排除する。



特定の用途

共焦点走査顕微鏡は、細胞の細胞質における細胞骨格線維のネットワーク、細胞分裂サイクルの異なる点での細胞の核における染色体および遺伝子の配置など、様々な複雑な三次元物体の構造を解決するためにしばしば用いられる。例えば、花粉は、複雑な彫刻された細胞壁を有し、これは、共焦点顕微鏡法を使用してはっきりとしか見ることができない。エレクトロニクス業界では、この機械と方法論を使用して半導体を検査しています。