IHCのための抗体の希釈液を作る方法

Immunohistochemistry（IHC）は、スライド上に置かれた組織内の細胞を視覚化し、調査中の細胞または組織に特有のタンパク質を認識する適切な抗体で染色する科学者が使用する専門技術です。
抗体の希釈液（滴定）は、抗体の製造元のものではなく、ユーザー独自のプロトコールで指定された実験条件を使用して行う必要があります。細胞が染色するために必要なもの
抗体と希釈液（希釈液）
ピペットとチップ
Microfugeチューブとアルミニウム箔
ラボマーカーとチューブラベル
氷と光で保護されたスライドボックス

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抗体を確認して準備する。抗体が正しい宿主で惹起され、試験されているタンパク質の正確なバージョン（アイソフォームまたはスプライス変異体）と反応することを確認します。
ピペットを使用して、注意深く10マイクロリットルの部分を「個人用ストック」としてください。

非常に少量の抗体しか入手できない場合は、この手順をスキップしてください。

の抗体は、元の株の交差汚染を防止するため、すべての研究室で日常的に行われています。これを光で保護された微量遠心チューブまたは通常の微量遠心チューブに入れ、直射日光を避けるためにアルミニウム箔で包みます。

このチューブは氷上に保管してください。再び抗体を破壊する光を最小にする。
抗体の名前を含むチューブの元のストック濃度（ミリリットル当たり100単位、1ミリリットルあたり1ミリグラムなど）を記録し、もしあればそれを希釈するバッファー（例えば血清、生理食塩水、または水など）。

抗体希釈液としても知られている希釈バッファーを調製します。これが抗体および免疫組織化学手順に適合していることを確認してください。たとえば、蛍光が不明瞭にならず、その後の2次抗体標識が阻害されないようにしてください。 1％リン酸緩衝生理食塩水を1％Triton-X100,10％ウシ胎児血清、0.2％アジ化ナトリウムと混合することにより、標準的な免疫組織化学的希釈液（ブロッキング緩衝液）を作製する。

抗体。 （マイクログラムあたりのマイクログラムなどの濃度単位で表される）個人ストック中の所定濃度の抗体を用いて、10マイクログラムの抗体を得るために必要な抗体の量を決定する。

体積をピペッティングすることによって希釈シリーズをセットアップする100マイクロリットルの希釈剤中に2マイクログラムの抗体（例えば、Xマイクロリットル）に等価であり、ピペットで上下に徹底的に混合する。この出発希釈液から、同じXマイクロリットルを取り出し、それを次の100マイクロリットルの希釈液に加える。これを8-10回の希釈（または一連の）が行われるまで繰り返す。
したがって、最後のチューブは最も低い濃度を有し、「飽和」状態になる。実験中に最も高いレベルの信号を生成する濃度である。しかし、理想的な濃度はこれよりもわずかに集中しているので、あまり信号が生成されず、バックグラウンドエラーが発生する可能性があります。

新しい希釈濃度のチューブに正しくラベルを付けます。