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細胞ベースのELISAプロトコル

     編集:病気

ELISAまたは酵素結合免疫吸着アッセイは、医学および生物学的研究における診断ツールとして使用され、特定のタンパク質の量を定量化する。
ELISAは、目的のタンパク質を検出する抗体および色を生成する試薬を使用する。色の量はタンパク質の量に関係する。細胞培養

細胞は、100μlの増殖培地を含む96ウェルプレートのウェルに置かれ、細胞は一晩沈殿する。因子に対する細胞の反応を研究している場合、細胞は24時間血清飢餓状態にしてから、試験中の因子で刺激する必要があります。


固定および一次抗体

培地を除去した後、細胞を3%ホルムアルデヒドまたはメタノールなどの固定剤で処理する。抗体を細胞に浸透させるためには、細胞膜を透過性にする必要がある。
透過率は、メタノールを以前に使用していない場合には、0.1%Tritonの使用によって達成することができる。非特異的結合は、リン酸緩衝化生理食塩水で希釈した10%ウシ胎児血清の使用により防止することができる。ブロックを除去した後、一次抗体を適用し、1時間インキュベートすることができる。二次抗体およびステイン

一次抗体を除去し、洗浄する3回。西洋ワサビペルオキシダーゼのような検出剤に連結された二次抗体を加える。 1時間インキュベートする。化学発光基質溶液を添加する。プレートを現像し、色の濃さを調べる。



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